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常见的生化试剂有哪些?
  随着生命科学的发展,生化试剂已发展成为化学试剂的一大类,有商品10000多种。中国销售的生化试剂品种有2500多种。目前在国内,生化试剂涵盖肝功、肾功、血脂、心肌、胰腺、特殊蛋白等,能够满足终端用户的各种生化检测需求。
  生化试剂的概念
  生化试剂是从生物体中提取的或由化学合成的生物体的基本成分,用于生物成分的分析鉴定及生物制品的制造。生化试剂主要是针对血常规、尿常规、肝功能、肾功能、胰腺、糖尿等疾病的诊断试剂。生化诊断是最早实现自动化的检测手段,也是目前常用的体外诊断方法之一。
  常见的生化试剂种类
  1、蛋白酶K
  能水解消化蛋白质,特别是与DNA结合的组蛋白。再尿素和SDS中稳定。一般工作浓度是50—100μg/ml,推荐反应缓冲液:50mM Tris-HCl (pH7.5),10mM CaCl2。
  2、SDS
  十二烷基硫酸钠溶解细胞膜上的脂类与蛋白质,因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜,并解离细胞中的核蛋白,SDS 还能与蛋白质结合而沉淀。
  3、IPTG
  异丙基-β-D-硫代半乳糖苷, 常用于蓝白斑筛选及IPTG诱导的细菌内的蛋白表达等. IPTG和乳糖的结构相似,所以它和乳糖一样,可以与乳糖操纵元的阻遏蛋白结合,使阻遏蛋白的空间构像变化,四聚体解聚成单体,失去与操纵子特异性结合的能力,从而解除了阻遏蛋白的作用,使其后的基因得以转录合成利用乳糖的酶类。
  与乳糖不同的是,IPTG不被β-半乳糖苷酶水解。常与X-GAL一起用于蓝白斑筛选。作用极强的诱导剂,不被细菌代谢而十分稳定。
  4、MOPS
  一种缓冲液,有抑制RNA酶的作用,一般和甲醛(用于变形RNA)用于RNA变性电泳。生化试剂
  5、盐酸胍
  盐酸胍等可使蛋白质结构中的氢键发生断裂,这增加了非极性分子包括氨基酸侧链的溶解度,减少了疏水相互作用。
  6、吖啶橙
  是一种荧光色素,与细胞中DNA和RNA结合量存在差别,可发出不同颜色的荧光,与DNA结合量少发绿色荧光,与RNA结合量多发桔黄色或桔红色荧光。该染料具有膜通透性,能透过细胞膜,使核DNA和RNA染色。
  在荧光显微镜下观察,吖啶橙可透过正常细胞膜,使细胞核呈绿色或黄绿色均匀荧光;而在凋亡细胞中,因染色质固缩或断裂为大小不等的片断,形成凋亡小体。吖啶橙使其染上致密浓染的黄绿色荧光,或黄绿色碎片颗粒;而坏死细胞黄荧光减弱甚至消失。
  吖啶橙AO常与溴化乙啶EB合用双染,因EB只染死细胞使之产生桔黄色荧光,由此可区分出正常细胞、凋亡细胞及坏死细胞。它还可以用作移码突变的诱变剂,能镶嵌于两个相邻的碱基对之间,这样在DNA复制过程中,会使DNA链增加或缺失一个碱基,造成移码突变。吖啶橙染液有毒,操作时要戴手套,需避光。
  7、DMSO
  二甲基亚砜实验室常用于作液体层析溶剂,同时用作测试物质紫外消光值上时用作参照物,能溶于所有烷烃和烯烃。
  8、TRICINE
  N-[三(羟甲基)甲基]甘氨酸, 常见的电泳系统是Tris-甘氨酸系统;Tris-Tricine电泳则用于分子量小于10kDa的多肽和蛋白的电泳,能够获得较好的分离效果. 可以用前者代替。生化试剂
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