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胃蛋白酶原elisa样品收集、处理及保存方法
  胃蛋白酶原elisa采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被胃蛋白酶原A(PG-A)抗体的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的胃蛋白酶原A(PG-A)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度。
  样品收集、处理及保存方法
  1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
  3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
  5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复冻融,在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
  胃蛋白酶原elisa操作注意事项
  1.试剂盒保存在2-8℃,使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
  2.实验中不用的板条应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。
  3.浓度为0的S0号标准品即可视为阴性对照或者空白;按照说明书操作时样本已经稀释5倍,最终结果乘以5才是样本实际浓度。
  4.严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
  5.胃蛋白酶原elisa所有液体组分使用前充分摇匀。
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