实时定量pcr仪广泛应用于各级各类医疗机构、大学及研究所、CDC、检验检疫局、兽医站、食品企业及乳品厂等。实时定量pcr仪由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光，与实时设备相连的计算机收集荧光数据，数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示，原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表，原始数据收集后可以开始分析，实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异，正常化后可以设定域值水平，这就是分析荧光数据的水平。

　　实时定量pcr仪主要工作原理：

　　标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得CT值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。

　　实时定量pcr仪日常保养维护方法如下：

　　1．清洗样品池：先打开盖子，用95%乙醇或10%清洗液浸泡样品池5min，再清洗被污染的孔；用微量移液器吸取液体，再借助棉签吸干剩余液体；打开PCR仪，设定保持温度为50℃的PCR程序并使之运行，让残余液体挥发，一般5-10min即可。

　　2．清洗热盖：对于荧光定量PCR仪，当荧光污染出现且污染不是来自样品池时，或当有污染或残迹物影响到热盖的松紧时，需要用压缩空气或纯水清洗垫盖底面，确保样品池的孔干净，无污物阻挡光路。

　　3．清洗仪器外表面：可除去灰尘和油脂，但达不到消毒效果，建议选择没有腐蚀性的清洗剂对仪器外表面进行清洗。

　　4．更换保险丝：先将PCR仪关机并拔去插头，打开电源插口旁边的保险盒，换上备用的保险丝，观察是否恢复正常。

　　5、PCR反应过程的关键是升、降温过程的时间控制，要求越短越好，当实时定量pcr仪的降温过程超过60s，就应该检查仪器的制冷系统——风冷制冷的PCR仪要*地清理反应底座的灰尘，其他制冷系统应检查相关的制冷部件。